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    產(chǎn)品展示PRODUCTS

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    己烯雌酚類檢測試劑盒
    產(chǎn)品時間:2016-11-06
    己烯雌酚類檢測試劑盒將進一步加強人才培養(yǎng)、產(chǎn)品創(chuàng)新,持續(xù)不斷地提升企業(yè)核心竟?fàn)幜Γ瑢崿F(xiàn)具有高科技產(chǎn)業(yè)體系、知識化創(chuàng)業(yè)團隊的化大集團企業(yè),更好、更快捷、更*的服務(wù)于生命科學(xué)領(lǐng)域,迎接新一輪世界經(jīng)濟一體化所帶來的機遇與挑戰(zhàn)。

    本產(chǎn)品僅用于科研,不用于臨床

    己烯雌酚類檢測試劑盒使用說明書(酶聯(lián)免疫法)

    己烯雌酚類檢測試劑盒原理及用途
    己烯雌酚是甾類同化激素,被大量用于促進反芻動物的生長。但由于己烯雌酚存在明顯的致癌性,歐美等發(fā)達國家已相繼禁止或嚴格禁止使用。我國農(nóng)業(yè)部第235號文件中規(guī)定,動物源性食品中己烯雌酚的殘留*為不得檢出。
    本試劑盒采用間接競爭ELISA方法檢測尿樣、組織、飼料等樣本中的己烯雌酚(Diethylstilbestrol,DES),試劑盒由預(yù)包被偶聯(lián)抗原的酶標(biāo)板、酶標(biāo)記物、抗體、標(biāo)準(zhǔn)品及其他配套試劑組成。檢測時,加入標(biāo)準(zhǔn)品或樣品溶液,樣本中的己烯雌酚和酶標(biāo)板上預(yù)包被偶聯(lián)抗原競爭抗己烯雌酚抗體,加入酶標(biāo)記物后,用TMB底物顯色,樣本吸光度值與其所含己烯雌酚含量成負相關(guān),與標(biāo)準(zhǔn)曲線比較即可得出樣本中己烯雌酚的殘留量。
    2 技術(shù)指標(biāo)
    2.1 試劑盒靈敏度:0.1ppb(ng/ml)
    2.2 反應(yīng)模式:37℃,30min~30min~15min
    2.3 檢測下限:
    組織(蝦、魚)………………………0.2ppb
    豬肉/肝、雞肉/肝……………………2ppb
    配合飼料………………………………10ppb
    濃縮/預(yù)混飼料………………………20ppb
    尿液……………………………………0.6ppb
    2.4 交叉反應(yīng)率:
    己烯雌酚………………………………100%
    雙烯雌酚………………………………38.5%
    己烷雌酚………………………………8.5%
    己炔雌二醇……………………………<0.1%
    雌三醇…………………………………<0.1%
     2.5 樣本回收率:
    尿     樣   ……………………… 70%±10%
    組     織   ……………………… 85%±10%
    飼     料   ……………………… 90%±10%
    3 試劑盒組成
    酶標(biāo)板……………………………96孔
    標(biāo)準(zhǔn)品:各1ml
    0ppb、0.1ppb、0.3ppb、0.9ppb、2.7ppb、8.1ppb
    酶標(biāo)記物(紅蓋)…………………11ml
    抗體工作液(藍蓋)………………5.5ml
    底物液A(白蓋)……………………6ml
    底物液B(黑蓋)……………………6ml
    終止液(黃蓋)………………………6ml
    20X濃縮洗滌液(白蓋)……………40ml
    5X復(fù)溶液(黃蓋)…………………50ml
    說明書………………………………1份
    需要的器材和試劑
    4.1 儀器:酶標(biāo)儀、打印機、均質(zhì)器 、氮氣吹干裝置、振蕩器、離心機、刻度移液管、天平(感量0.01g)
    4.2 微量移液器:單道20µl-200µl,100µl-1000µl、多道300µl
    4.3 試劑:乙腈、氫氧化鈉、丙酮、濃磷酸(含量85%)
    5 樣本前處理
    5.1 樣本處理前須知:
    實驗器具必須潔凈并使用一次性吸頭,以避免污染干擾實驗結(jié)果。
    5.2 配液:
    配液1:6M H3PO4 溶液
    100ml 濃H3PO4(含量85%)加去離子水150ml混合均勻。
    配液2:2M NaOH溶液
        8gNaOH加去離子水100ml溶解。
    配液3:1M NaOH溶液
        4g NaOH加去離子水100ml溶解。
    配液4:乙腈-丙酮混合液
        V乙腈:V丙酮=4:1
    配液5:復(fù)溶液
        將5×復(fù)溶液用去離子水5倍稀釋,用于樣本的復(fù)溶,復(fù)溶液在4℃環(huán)境可保存一個月。
    5.3 樣本前處理步驟:
    5.3.1 組織(雞、鴨、豬肉/豬肝、蝦、魚)樣本處理方法 
    1)稱取2±0.05g勻漿后的樣本,加入6ml乙腈-丙酮混合液,振蕩2min,15℃4000r/min離心10min; 
    2)取3ml上清液,60℃氮氣/空氣吹干; 
    3)加入0.5ml氯,振蕩20s,加入2ml 2M NaOH,振蕩30s,4000r/min離心5min; 
    4)取上清液1ml,加入200µl 6M H3PO4,振蕩5s; 
    5)加入3ml乙腈萃取,振蕩2min,室溫4000r/min離心10min,取上層有機相,60℃氮氣/空氣吹干; 
    6)用1ml樣本復(fù)溶液溶解干燥的殘留物,振蕩混勻30s。
    不同樣本按如下方法稀釋: 
    A)蝦魚:直接取50µl水相用于檢測。 
        樣本稀釋倍數(shù):2    檢測下限:0.2ppb
    B)豬肉/肝、雞肉/肝:取50µl水相加入450µl樣本復(fù)溶液,振蕩混合30s;取50µl用于檢測。
        樣本稀釋倍數(shù):20    檢測下限:2ppb
    5.3.2 飼料樣本處理方法 
    1)稱取2±0.05g搗粹后的飼料樣本,加入8ml乙腈,振蕩2min,15℃ 4000r/min離心10min; 
    2)取2ml上清液,60℃氮氣/空氣吹干; 
    3)加入0.5ml氯,振蕩20s,加入2ml 1M NaOH,振蕩30s,4000r/min離心5min; 
    4)取1ml上清液,加入100µl 6M H3PO4,振蕩5s;
    不同樣本按如下方法稀釋: 
    A)配合料:取50µl,加入950µl樣本復(fù)溶液,振蕩混勻30s,取50µl 用于檢測。
        樣本稀釋倍數(shù):100    檢測下限:10ppb
    B)濃縮料/預(yù)混料:取25µl,加入975µl樣本復(fù)溶液,振蕩混勻30s,取50µl 用于檢測。
        樣本釋倍數(shù):200    檢測下限:20ppb 
    5.3.3 尿樣樣本處理方法 
    1)取2ml尿液到離心管中,室溫4000r/min離心10min,直至清亮; 
    2)移取1ml清亮尿液至離心管中,加入1ml 1M NaOH強烈振蕩5min; 
    3)加入100µl 6M H3PO4,振蕩30 s; 
    4)再加入8ml氯進行萃取,振蕩5min。15℃4000r/min離心10min; 
    5)去掉上層的水相,取下層有機相4 ml,60℃氮氣吹干; 
    6)用3ml樣本復(fù)溶液干燥的殘留物,混合30s;
    7)取50µl用于分析。 
        樣本稀釋倍數(shù):6    檢測下限:0.6ppb
    6 酶聯(lián)免疫試驗步驟
        將所需試劑從4℃冷藏環(huán)境中取出,置于室溫平衡30min以上, 洗滌液冷藏時可能會有結(jié)晶需恢復(fù)到室溫以充分溶解,每種液體試劑使用前均須搖勻。取出需要數(shù)量的微孔板及框架,將不用的微孔板放入自封袋,保存于2-8℃。
    實驗開始前,用去離子水將20×濃縮洗滌液按20倍稀釋成工作洗滌液。
    6.1 編    號:將樣本和標(biāo)準(zhǔn)品對應(yīng)微孔按序編號,每個樣本和標(biāo)準(zhǔn)品做2孔平行,并記錄標(biāo)準(zhǔn)孔和樣本孔所在的位置。
    6.2 加樣反應(yīng):加標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)用液或樣本50µl/孔到各自的微孔中,然后加抗體工作液50µl/孔,輕輕振蕩5秒混勻,37℃避光反應(yīng)30分鐘。
    6.3 洗    滌:將孔內(nèi)液體甩干,用工作洗滌液250µl/孔充分洗滌5次,每次間隔30秒,zui后用吸水紙拍干(拍干后未被清除的氣泡可用干凈的槍頭刺破)。
    6.4 加酶反應(yīng):加酶標(biāo)記物100µl/孔,37℃避光反應(yīng)30分鐘。
    6.5 洗    滌:同上
    6.6 顯    色:加底物液A 50µl/孔,再加底物液B 50µl/孔,輕輕振蕩5秒混勻,37℃避光顯色15分鐘。
    6.7 終    止:加終止液50µl/孔,輕輕振蕩混勻,終止反應(yīng)。
    6.8 測吸光值:用酶標(biāo)儀于450nm處測定每孔吸光度值(建議用雙波長450/630nm)。測定應(yīng)在終止反應(yīng)后10分鐘內(nèi)完成。
    結(jié)果分析
    7.1 百分吸光率的計算
        標(biāo)準(zhǔn)液或樣本的百分吸光率等于標(biāo)準(zhǔn)液或樣本的百分吸光度值的平均值(雙孔)除以*個標(biāo)準(zhǔn)液(0ppb)的吸光度值,再乘以100%,即
     百分吸光度值(%)=
    A
    ×100%
    A0
    A—標(biāo)準(zhǔn)溶液或樣本溶液的平均吸光度值
    A0—0ppb標(biāo)準(zhǔn)溶液的平均吸光度值
    7.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制與計算
        以標(biāo)準(zhǔn)液百分吸光率為縱坐標(biāo),對應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)液濃度(ppb)的對數(shù)為橫坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)液的半對數(shù)曲線圖。將樣本的百分吸光率代入標(biāo)準(zhǔn)曲線中,從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出樣本所對應(yīng)的濃度,乘以其對應(yīng)的稀釋倍數(shù)即為樣本中待測物的實際濃度。
        若利用試劑盒專業(yè)分析軟件進行計算,更便于大量樣本的準(zhǔn)確、快速分析。(索取)
    8 注意事項
    8.1 室溫低于25℃或試劑及樣本沒有回到室溫(25℃)會導(dǎo)致所有標(biāo)準(zhǔn)的OD值偏低。
    8.2 在洗板過程中如果出現(xiàn)板孔干燥的情況,則會出現(xiàn)標(biāo)準(zhǔn)曲線不成線性,重復(fù)性不好的現(xiàn)象。所以洗板拍干后應(yīng)立即進行下一步操作。
    8.3 混合要均勻,洗板要*,在ELISA分析中的再現(xiàn)性,很大程度上取決于洗板的*性。
    8.4 在所有孵育過程中,用蓋板膜封住微孔板,避免光線照射。
    8.5 不要使用過了有效期的試劑盒,不要交換使用不同批號試劑盒中的試劑。
    8.6 顯色液若有任何顏色表明變質(zhì),應(yīng)當(dāng)棄之。0標(biāo)準(zhǔn)的吸光度值小于0.5個單位(A450nm< 0.5 )時,表示試劑可能變質(zhì)。
    8.7 反應(yīng)終止液有腐蝕性,避免接觸皮膚。
    9 貯藏及保存期
    儲藏條件:試劑盒于2-8℃保存,避免冷凍。
    保 質(zhì) 期:該產(chǎn)品有效期為1年,生產(chǎn)日期見包裝盒。

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