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      大鼠皮質酮/腎上腺酮(CORT)Elisa試劑盒說明書

      發布時間: 2010-09-07  點擊次數: 1367次

      本產品僅供研究使用
      【大鼠皮質酮/腎上腺酮(CORT)Elisa試劑盒試劑盒名稱】
      大鼠皮質酮/腎上腺酮(CORT)定量檢測試劑盒(ELISA)
      【大鼠皮質酮/腎上腺酮(CORT)Elisa試劑盒試劑盒用途】
      定量檢測大鼠血清、血漿及相關液體樣本中皮質酮/腎上腺酮(CORT)的含量。
      【大鼠皮質酮/腎上腺酮(CORT)Elisa試劑盒檢測原理】
      本試劑盒采用雙抗體兩步夾心酶聯免疫吸附法(ELISA)。將標準品、待測樣本加入到預先包被大鼠皮質酮/腎上腺酮(CORT)單克隆抗體透明酶標包被板中,溫育足夠時間后,洗滌除去未結合的成分,再加入酶標工作液,溫育足夠時間后,洗滌除去未結合的成分。依次加入底物A、B,底物(TMB)在辣根過氧化物酶(HRP)催化下轉化為藍色產物,在酸的作用下變成,顏色的深淺與樣品中大鼠皮質酮/腎上腺酮(CORT)濃度呈正相關,450nm波長下測定OD值,根據標準品和樣品的OD值,計算樣本中大鼠皮質酮/腎上腺酮(CORT)含量。
      【大鼠皮質酮/腎上腺酮(CORT)Elisa試劑盒試劑盒組成】

      1
       酶標包被板
       12孔×8條
       7
       顯色劑A液
       6mL
       
      2
       標準品
       0.3mL×6管
       8
       顯色劑B液
       6mL
       
      3
       20倍濃縮洗滌液
       25mL
       9
       終止液
       6mL
       
      4
       樣本稀釋液
       6mL
       10
       說明書
       1份
       
      5
       特殊稀釋液
       6mL
       11
       封板膜
       2張
       
      6
       酶標試劑
       6mL
       12
       密封袋
       1個
       


      備注:標準品(1號→6號)濃度依次為:480、240、120、60、30、15ng/L.
       
      【大鼠皮質酮/腎上腺酮(CORT)Elisa試劑盒需要而未提供的試劑和器材】
      1、37℃恒溫箱
      2、標準規格酶標儀
      3、精密移液器及一次性吸頭
      4、蒸餾水
      5、一次性試管
      6、吸水紙
      【大鼠皮質酮/腎上腺酮(CORT)Elisa試劑盒操作步驟】
      1、準備:從冰箱取出試劑盒,室溫復溫平衡30分鐘。
      2、配液:用蒸餾水將20倍濃縮洗滌液稀釋成原倍的洗滌液。
      3、加標準品和待測樣本:取足夠數量的酶標包被板,固定于框架上,分別設置標準品孔、待測樣本孔和空白對照孔,記錄各孔位置,在標準品孔中加入標準品50μL;待測樣本孔中先加入待測樣本10μL,再加樣本稀釋液40μL(即樣本稀釋5倍);空白對照孔不加。
      4、溫育:37℃水浴鍋或恒溫箱溫育30min。
      5、洗板:棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液,靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復洗板4次(也可用洗板機按說明書操作洗板)。
      6、加酶標工作液:每孔加入酶標工作液50μL,空白對照孔不加。
      7、溫育:37℃水浴鍋或恒溫箱溫育30min。
      8、洗板:棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液,靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復洗板4次(也可用洗板機按說明書操作洗板)。
      9、顯色:每孔先加入顯色劑A 液50μL,再加入顯色劑B液 50μL,平板混勻器混勻30s(或用手輕輕震蕩混勻30s),37℃避光顯色15min。
      10、終止:取出酶標板,每孔加終止液50μL,終止反應(顏色由藍色立轉)。
      11、測定:以空白孔調零,在終止后15分鐘內,用450nm波長測量各孔的吸光值(OD值)。
      12、計算:根據標準品的濃度及對應的OD值,計算出標準曲線的直線回歸方程,再根據樣本的OD值,在回歸方程上計算出對應的樣品濃度,也可以使用各種應用軟件來計算。zui終濃度為實際測定濃度乘以稀釋倍數。
      【大鼠皮質酮/腎上腺酮(CORT)Elisa試劑盒樣本要求】
      1、樣本不能含疊氮鈉(NaN3),因為疊氮鈉(NaN3)是辣根過氧化物酶(HRP)的抑制劑。
      2、標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能立即試驗,可將標本放于-20℃保存,但應避免反復凍融。
      3、樣本應充分離心,不得有溶血及顆粒。
      【大鼠皮質酮/腎上腺酮(CORT)Elisa試劑盒注意事項】
      1、實驗嚴格按照說明書的操作進行,實驗結果判定必須以酶標儀讀數為準。
      2、酶標包被板開封后如未用完,應立即裝入密封袋中加干燥劑保存。
      3、建議所有的標準品、樣本和空白對照都做雙份檢測,取平均值,以減小實驗誤差。
      4、牢記樣本已經稀釋5倍,計算結果乘以5才是樣本實際濃度。
      5、本試劑盒定量范圍為15-480ng/L,超過此范圍,為標準曲線延伸計算所得,不做為準確定量結果,請用特殊稀釋液稀釋后測定準確結果(15-480ng/L范圍內),乘以總稀釋倍數即為樣本zui終濃度。
      6、若顯色過淺,可適當延長底物溫育時間。
      7、為避免交叉污染,標準品、樣本和空白對照每加一個就要更換一次吸頭;酶標工作液、樣本稀釋液和底物等公共組分,要懸臂加樣,不得碰到微孔;不得重復使用封板膜。
      8、試劑盒保質期內使用,不同批號的試劑不得混用。
      9、底物B對光敏感,避免長時間暴露于光下。
       
      【大鼠皮質酮/腎上腺酮(CORT)Elisa試劑盒操作程序總結】
       
      準備試劑,樣品和標準品
       

       

      加入準備好的樣品和標準品,37℃反應30分鐘
       
      洗板4次,加入酶標試劑,37℃反應30分鐘
       
      洗板4次,加入顯色液A、B,37℃顯色15分鐘
       
      加入終止液
       
      15分鐘之內讀OD值
       
      計算
       
      【大鼠皮質酮/腎上腺酮(CORT)Elisa試劑盒檢測范圍】
      15ng/L – 480ng/L
      【大鼠皮質酮/腎上腺酮(CORT)Elisa試劑盒規格】
      96人份/盒
      【大鼠皮質酮/腎上腺酮(CORT)Elisa試劑盒貯藏】
      2-8℃,避光防潮保存。
      【大鼠皮質酮/腎上腺酮(CORT)Elisa試劑盒有效期】
      6個月

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