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      96T人白細胞介素-17ELISA檢測試劑盒的試驗步驟

      發布時間: 2012-10-29  點擊次數: 988次

      上海研域網絡有限公司專業供應各種屬ELISA試劑盒,金標試劑盒,細胞株,抗體,生物試劑,生物耗材,食品檢測試劑盒,放免試劑盒,胎牛血清,提供免費代測服務,保證實驗結果客觀真實性。

      人白細胞介素-17ELISA檢測試劑盒

      用 途:
          人IL-17 ELISA試劑盒用于體外定量檢測血清、血漿、組織、緩沖液中細胞上清液及各種體液中的IL-17 。本試劑盒可以檢測天然和重組的IL-17 。本試劑盒于科研、而非用于臨床診斷。
          
      試驗原理:
          人IL-17 試劑盒是固相夾心法酶聯免疫吸附實驗(ELISA).已知IL-17 濃度的標準品、未知濃度的樣品加入微孔酶標板內進行檢測。先將IL-17 和生物素標記的抗體同時溫育。洗滌后,加入親和素標記過的HRP。再經過溫育和洗滌,去除未結合的酶結合物,然后加入底物A、B,和酶結合物同時作用。產生顏色。顏色的深淺和樣品中IL-17 的濃度呈比例關系。
         
      自備材料
      蒸餾水。
      加樣器:5ul、10 ul、50 ul、100 ul、200、500 u、1000lul。
      振蕩器及磁力攪拌器等。

      人白細胞介素-17ELISA檢測試劑盒

      安全性
      此試劑盒的人血制品中的HbsAg、和抗HIV為陰性,但沒有實驗室可*保證此血制品不會傳染肝炎、AIDS或其它傳染病,依據當地的安全條例處理本試劑盒里的成份及血清和血漿等樣品。
      避免直接接觸終止液和底物A、B。一旦接觸到這些液體,請盡快用水沖洗。
      實驗中不要吃喝、抽煙或使用化妝品。
      不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份。

      操作注意事項
      試劑應按標簽說明書儲存,使用前恢復到室溫。稀稀過后的標準品應丟棄,不可保存。
      實驗中不用的板條應立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質。
      不用的其它試劑應包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質前使用。
      使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時,避免使用帶金屬部分的加樣器。
      使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。
      洗滌酶標板時應充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標反應孔中吸水。
      底物A應揮發,避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感,避免長時間暴露于光下。避免用手接觸,有毒。實驗完成后應立即讀取OD值。
      加入試劑的順序應一致,以保證所有反應板孔溫育的時間一樣。
      按照說明書中標明的時間、加液的量及順序進行溫育操作。

      人白細胞介素-17ELISA檢測試劑盒

      樣品收集、處理及保存方法
      血清-----操作過程中避免任何細胞刺激。使用不含熱原和內毒素的試管。收集血液后,1000×g離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
      血漿-----EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測。1000×g離心30分鐘去除顆粒。
      細胞上清液---1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。
      保存------如果樣品不立即使用,應將其分成小部分-70 ℃保存,避免反復冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒,檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

      人白細胞介素-17ELISA檢測試劑盒

      操作步驟
      使用前,將所有試劑充分混勻。不要使液體產生大量的泡沫,以免加樣時加入大量的氣泡,產生加樣上的誤差。
      根據待測樣品數量加上標準品的數量決定所需的板條數。每個標準品和空白孔建議做復孔。每個樣品根據自己的數量來定,能使用復孔的盡量做復孔。
      加入稀釋好后的標準品50ul于反應孔、加入待測樣品50ul于反應孔內。立即加入50ul的生物素標記的抗體。蓋上膜板,輕輕振蕩混勻,37℃溫育1小時。
      甩去孔內液體,每孔加滿洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重復此操作四次。如果用洗板機洗滌,洗滌次數增加一次。
      每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP,輕輕振蕩混勻,37℃溫育30分鐘。
      甩去孔內液體,每孔加滿洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重復此操作四次。如果用洗板機洗滌,洗滌次數增加一次。
      每孔加入底物A、B各50ul,輕輕振蕩混勻,37℃溫育15分鐘。避免光照。
      取出酶標板,迅速加入50ul終止液,加入終止液后應立即測定結果。
      在450nm波長處測定各孔的OD值。

      人白細胞介素-17ELISA檢測試劑盒

      結果分析
      以吸光度OD值為縱坐標(Y),相應的IL-17 標準品濃度為橫坐標(X),做得相應的曲線,樣品的IL-17 含量可根據其OD值由標準曲線換算出相應的濃度。

      局限
      6號標準品以上的結果為非線性的,根據此標準曲線無法得到的結果。

      試劑盒性能
      靈敏度:zui小的檢測濃度小于1號標準品。稀釋度的線性。樣品線性回歸與預期濃度相關系數R值為0.990。
      特異性:不與人其它細胞因子反應。
      重復性:板內、板間變異系數均小于10%。
      Rabbit anti-guinea pig IgM/RBITC 羅丹明標記兔抗豚鼠IgM 0.3ml
      Rabbit anti-bov IgG/RBITC 羅丹明標記兔抗牛IgG 0.3ml
      Rabbit anti-bov IgM/RBITC 羅丹明標記兔抗牛IgM 0.3ml
      Rabbit anti-chi IgM/RBITC 羅丹明標記兔抗雞IgM 0.3ml
      HCFHrp/BTA(Bladdertumor antigen)human 膀胱腫瘤抗原抗體 0.2ml
      HCN4(Hyperpolarization activated Cyclic Nucleotide-gated channel 4) 環化核苷酸調控陽離子通道蛋白亞型4 0.2ml
      HCV-Core 丙型肝炎病毒-C區抗體 0.1ml
      HCV-HCBP1/ACY-3(Hepatitis C viruscore- binding protein 1) 丙型肝炎病毒核心蛋白結合蛋白-1抗體 0.2ml

      若需要了解試劑盒的詳細信息,詳情:謝明: 

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